一、初始培养阶段
1、培养物水浸状、变色、坏死、茎断面附近干枯
可能原因:表面杀菌剂过量,消毒时间过长,外植体选用不当(部位或时期)。
改进措施:调换其他杀菌剂或降低浓度,缩短消毒时间,试用其他部位,生长初期取材。
2、培养物长期培养几乎无反应
可能原因:基本培养基不适宜,生长素不当或用量不足,温度不适宜。
改进措施:更换基本培养基或调整培养基成分,尤其是调整盐离子浓度,增加生长素用量,试用2,4-D,调整培养温度。
3、愈伤组织生长过旺、疏松,后期水浸状
可能原因:激素过量,温度偏高,无机盐含量不当。
改进措施:减少激素用量,适当降低培养温度,调整无机盐(尤其是铵盐)含量,适当提高琼脂用量增加培养基硬度。
4、愈伤组织太紧密、平滑或突起,粗厚,生长缓慢
可能原因:细胞分裂素用量过多,糖浓度过高,生长素过量。
改进措施:减少细胞分裂素用量,调整细胞分裂素与生长素比例,降低糖浓度。
5、侧芽不萌发,皮层过于膨大,皮孔长出愈伤组织
可能原因:枝条过嫩,生长素、细胞分裂素用量过多。
改进措施:减少激素用量,采用较老化枝条。
二、继代培养阶段
1、苗分化数量少、速度慢、分枝少、个别苗生长细高
可能原因:细胞分裂素用量不足,温度偏高,光照不足。
改进措施:增加细胞分裂素用量,适当降低温度,改善光照,改单芽继代为团块(丛芽)继代。
2、苗分化过多,生长慢,有畸形苗,节间极短,苗丛密集,微型化
可能原因:细胞分裂素用量过多,温度不适宜。
改进措施:减少或停用细胞分裂素一段时间,调节温度。
3、分化率低,畸形,培养时间长时苗再次愈伤组织化
可能原因:生长素用量偏高,温度偏高。
改进措施:减少生长素用量,适当降温。
4、叶粗厚变脆
可能原因:生长素用量偏高,或兼有细胞分裂素用量偏高。
改进措施:适当减少激素用量,避免叶片接触培养基。
5、再生苗的叶缘、叶面等处偶有不定芽分化出来
可能原因:细胞分裂素用量偏高,或表明该种植物适于该种再生方式。
改进措施:适当减少细胞分裂素用量,或分阶段地利用这一再生方式。
6、丛生苗过于细弱,不适于生根或移栽
可能原因:细胞分裂素浓度过高或赤霉素使用不当,温度过高,光照短,光强不足,久不转移,生长空间窄。
改进措施:减少细胞分裂素用量,免用赤霉素,延长光照时间,增强光照,及时转接,降低接种密度,更换封瓶纸的种类。
7、幼苗淡绿,部分失绿
可能原因:无机盐含量不足,PH值不适宜,铁、锰、镁等缺少或比例失调,光照、温度不适。
改进措施:针对营养元素亏缺情况调整培养基,调好PH值,调控温度、光照。
8、幼苗生长无力、发黄落叶、有黄叶、死苗夹于丛生苗中
可能原因:瓶内气体状况恶化,PH值变化过大,久不转接导致糖已耗尽,营养元素亏缺失调,温度不适,激素配比不当。
改进措施:及时转接、降低接种密度,调整激素配比和营养元素浓度,改善瓶内气体状况,控制温度。
三、生根阶段
1、培养物久不生根,基部切口没有适宜的愈伤组织
可能原因:生长素种类、用量不适宜;生根部位勇气不良;生根程序不当;PH值不适,无机盐浓度及配比不当。
改进措施:改进培养程序,选用适宜的生长素或增加生长素用量,适当降低无机盐浓度,改用滤纸桥液培养生根等。
2、愈伤组织生长过快、过大,根茎部肿胀或畸形,几条根并联或愈合。
可能原因:生长素种类不适,用量过高,或伴有细胞分裂素用量过高,生根诱导培养程序不对。
改进措施:调换生长素种类或几种生长素配合使用,降低使用浓度,附加VB2或PG等减少愈伤,改变生根培养程序等