布氏杆菌的平板凝集与试管凝集

2011-8-4 14:59:15 百度

平板凝集反应（以布氏杆菌为例）

（一）取洁净玻片一块，用玻璃铅笔划成五行小格，并标明待检血清的号码。

（三）按表8-1滴加待检血清、抗原（将牛、羊、猪三型布氏杆菌悬浮于甘油浓盐水中，加入煌绿及结晶紫制成）和生理盐水（检查绵羊、山羊血清时，用12％浓盐水）。血清用前需放室温，使其温度达20℃左右。

表8-1 布氏杆菌的平板凝集反应

（三）用火柴棒自血清量最少格起,依次往前搅拌，使血清与抗原混匀，每份血清用一根火柴棒。

（四）混合完毕后，将玻片置于凝集反应箱上均匀加温，或放于离火焰稍高处，微微加温至30℃左右，3～5分钟内记录反应结果。

（五）按下列标准记录反应强度

++++：出现大的凝集块、液体完全透明。

+++：有明显凝集块、液体几乎完全透明，即75%凝集。

++：有可见凝集片，液体不甚透明，即50％凝集。

+：液体混浊，有小的颗粒状物，即25％凝集。

－：液体均匀混浊，无凝集物。

牛、马和骆驼的血清在0.02ml处或以上凝集，而绵羊、山羊和猪的血清在0.04ml处或以上凝集，判为阳性反应；牛、马和骆驼的血清在0.04ml处凝集，绵羊、山羊和猪的血清在0.08ml处凝集时判为可疑反应。

大规模检疫时，允许只用两个血清量作试验，牛、马、骆驼用0.04和0.02ml，猪、山羊和绵羊、狗用0.08和0.04ml。如用两个血清量作试验，任何一个血清量出现凝集时，均需用四个血清量重检。

（六）每次试验须用标准阳性血清和阴性血清作对照。

试管凝集反应

（一）每份血清用4支试管（1×8cm），另取对照管3支。如待检血清多时，只设一份对照组。

（二）按表8-2，用0.5％石炭酸生理盐水，将被检血清稀释成四个稀释度。第五管中不加血清，设抗原对照。第六管中加1：25稀释的布氏杆菌阳性血清0.5毫升作阳性对照。第七管中加1：25稀释的布氏杆菌阴性血清0.5毫升作阴性对照。

（三）各管中加入用0.5％石炭酸生理盐水稀释20倍的布氏杆菌抗原0.5ml（每ml含菌8亿）。

（四）各管加抗原后，将各管充分混匀，放37℃温箱中感作4～10小时，取出后放室温18～24小时，然后观察并记录结果。

（五）检查猪、羊、狗时血清稀释度为1:25，1:50，1:100，1:200；绵羊、山羊血清用10％浓盐水稀释。牛、马和驼骆血清稀释度为1:50，1:100，1:200，1:400，大规模检疫可只用两个稀释度，即狗、猪、羊为1:25，1:50；牛、马、骆驼为1:50和1:100。

判定结果时用“十”表示反应强度：

++++：液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒状（即100％的菌体被凝集）。

+++：液体略混浊，菌体大部分被凝集于管底，振荡时呈片状或颗粒状（75％菌体被凝集）。

++：液体不透明，管底有明显凝集片，振荡时有块状或小片絮状物（50％菌体被凝集）。

+：液体不透明，仅管底有少许凝集，其余无显著的凝集块（25％菌体被凝集）。

－：液体混浊，管底无凝集，菌体不被凝集，但由于菌体自然下沉，在管底中央可见圆点状沉淀，振荡后立即散开呈均匀混浊。

（六）当每份待检血清仅用2个稀释度进行试验时，无论任何一个稀释度发生凝集现象，该血清都应该用四个稀释度重检。

（七）判定血清凝集价：出现“++”以上凝集现象的最高血清稀释度为凝集价。牛、马和骆驼血清凝集价1:100以上为阳性，1:50为可疑。猪、绵羊、山羊和狗的血清凝集价为1:50以上为阳性，1:25可疑。