主要病原菌的认识（二）

目的要求

认识葡萄球菌、链球菌、鼻疽杆菌、肉毒梭菌、魏氏梭菌的形态染色特性和培养特性。

操作步骤

一、葡萄球菌

可挑取葡萄球菌的培养物或病料涂片，自然干燥后，火焰固定，用革兰氏染色后，镜检观察。

（一）形态染色特性  革兰氏阳性呈葡萄串状排列，在病料涂片中，常呈单个，成对或短链状，在固体培养基上生长的常呈典型的葡萄串状排列。不形成芽胞，无鞭毛，不运动。某些葡萄球菌形成荚膜或粘液层。

（二）培养特性  普通琼脂上菌落呈圆形、湿润、不透明，边缘整齐表面隆起的光滑菌落。由于菌株不同可呈现黄色、白色或柠檬色。血液琼脂平板上多数致病性菌株形成明显的溶血。

二、链球菌

挑取链球菌培养物或取病料（脓汁、乳汁、渗出液等）涂片，用革兰氏染色或碱性美蓝染色，镜检后观察。

（一）形态染色特性  革兰氏阳性链球菌，多数链球菌在血清肉汤中常呈长链状排列，幼龄培养物易发现荚膜，以后消失，而在固体培养基上或病料涂片上，常为短链状排列，有些链球菌在脓汁中常呈长链状排列。

（二）培养特性  营养要求高，在普通琼脂培养基上生长不良，在血琼脂上形成透明、闪光、微隆起有粘性的露滴样的小菌落，有溶血现象，分为三型；甲型（α）溶血又称绿色溶血型，有些不产生典型的溶血现象，培养24小时后，在血平板深处形成绿灰色菌落，其周围有不透明绿色轮晕。乙型（β）溶血，在血平板上菌落周围形成无色透明的溶血环，其直径有时超过菌落的直径。丙型（γ）溶血，又称非溶血型，在血平板上的菌落周围不产生溶血现象。

三、鼻疽杆菌

病料可取患马的鼻汁、皮肤溃疡分泌物、脓肿的穿刺物及病死马内脏（肺脏、肺的淋巴结、肝、脾等）作涂片，自然干燥后用革兰氏染色或碱性美蓝染色，待干后，镜检观察。

（一）形态染色特性  革兰氏阴性短杆菌，菌端钝圆，形状平直或微弯。在病料中多单在，有时成双或成丛排列。老龄菌呈显著的多形性，如球杆状、分枝状和长丝状等。其陈旧培养物用美蓝染色时，可见到着色不均匀的颗粒。

（二）培养特性  在甘油琼脂上，24小时后形成细小、正圆形、灰白色带有黄色光泽，表面湿润，半透明，稍粘稠的小菌落。培养时间延长，菌落增大至2～3mm，呈灰黄色。在马铃薯培养基上，可生成黄棕色粘稠的蜂蜜样菌落。在孔雀绿酸性复红琼脂上，菌落呈淡绿色。不溶血，有特臭。

四、魏氏梭菌（产气荚膜梭菌）

用疱肉培养基的培养物注射小白鼠，死后取肝脏抹片或取培养物涂片，用瑞特氏或革兰氏染色，干后、镜检、观察。

（一）形态染色特性  革兰氏阳性粗大杆菌，两端钝圆，单在、成双排列，或短链排列。有芽胞，位于菌体中央或近端。在机体内形成荚膜，无鞭毛，不能运动。

（二）培养特性  厌氧菌，但不严格，营养要求不高，在普通琼脂上呈灰白色不透明，表面光滑，边缘整齐的菌落（直径2～5mm），葡萄糖血清琼脂上形成中央隆起或圆盘样大菌落，表面有放射状条纹，边缘锯齿状，灰白色、半透明，外观好似“勋章”。血琼脂有明显β溶血。

五、肉毒梭菌

用疱肉培养基的培养物注射小白鼠死后，取肝触片、或培养物抹片，用瑞氏染色或革兰氏染色，干燥镜检。

（一）形态特性  革兰氏阳性较粗大杆菌。菌体两端钝圆,多数单在，偶尔有成对和短链状排列。有周鞭毛，运动活泼，无荚膜，有芽胞，呈椭圆形。A、B型菌株芽胞的直径大于菌体的横径，位于菌体近端，故菌呈匙形或网球拍状。其余菌型芽胞的直径一般不超过菌体横径。

（二）培养特征  为严格厌氧菌，对营养要求不严格。在普通琼脂上形成灰白色、半透明边缘不整齐的绒毛网状、并向外扩散的菌落，直径为3～5mm。血清琼脂上培养48～72小时，形成中央隆起，边缘不整齐，灰白色较粗糙绒球菌落。卵黄琼脂平板上，在肉毒梭菌菌落之下的培养基形成局限性乳白色不透明区域，同时还形成一层彩虹样光彩覆盖在菌落及其边缘的琼脂上。疱肉培养基上，生长良好，开始生长的1～2天，肉汤呈均匀混浊，A、B、F型菌将肉渣消化呈烂泥状，肉渣变黑，有恶臭味，产生气体。培养两天后，混浊肉汤变清亮，菌体下沉于管底。