(1)直接镜检:
①直接涂片染色:将标本涂片,固定后用1∶10稀释石炭酸复红染色和革兰氏染色,镜检有无典型弧菌。典型霍乱弧菌互相连接平行排列,有如“鱼群”。
②悬滴标本:将标本制成悬滴(点击查看悬滴标本制作方法),镜检细菌动力,最好用暗视野显微镜。霍乱弧菌运动活泼,呈小鱼穿梭状。
(2)分离培养:将吐泻物直接或先经碱性胨水增菌后,接种于庆大霉素琼脂等培养基,容易检出霍乱弧菌。应用荧光抗体检测粪便中霍乱弧菌,可于1~2小时内获得结果。
(3)血清学检查:可作血清凝集试验。在发病第1~3日及第10~15日各取1份血清,若第2份血清的抗体效价比第1份增高4倍或4倍以上,有诊断参考价值。
(4)制动试验——快速诊断:在急性病人的水样便中含有大量弧菌,如悬滴检查阳性,再滴加不含防腐剂的霍乱多价血清(使用浓度为1∶64),几分钟内细菌运动停止,凝集成块即为阳性。
霍乱弧菌检测流程:
1、悬滴试验:霍乱弧菌在高倍镜下运动异常活跃,如流星状,迅速穿过一高倍视野。
2、免疫制动试验:若标本检查发现动力典型,可做制动试验。将米泔水样便与多价O免疫血清各一滴混合均匀后做悬滴检查。若为阳性,可于3-5分钟内停止运动,并凝集成块。(多价O血清在体液室冰箱玻璃瓶中)
3、霍乱弧菌培养
米泔水样便
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拭子放入碱性蛋白胨水(在生物安全柜旁冰箱门上)做好登记(专用本子,姓名、年龄、性别、症状、地址)写上接种时间
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若混浊生长转4 号琼脂(在生物安全柜旁冰箱盒中,盒上标有O2培养基)写上转种时间
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可疑菌做血清学试验(诊断血清在生物安全柜旁冰箱冰冻层)
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