酸奶中嗜热链球菌的分离及鉴定（1）

2011-9-15 10:36:11 维普

酸奶是经乳酸菌发酵的乳类，是一种人们非常喜爱的发酵食品。具有维持肠道菌群平衡、增加免疫功能、降低血浆和肝脏的胆固醇含量、抗肿瘤、延缓机体衰老等保健作用。黑龙江省牡丹江市生产的“ 三道” 牌酸奶所用的乳酸菌种为保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，在普通细菌培养基上菌落生长较小，不易被观察到，分离具有一定的困难。本实验建立了实验室快速分离和鉴定嗜热链球菌的方法。

1. 材料与方法

1.1分离培养基

BCG牛乳培养基：

( A) 溶液：脱脂乳粉2 0 g，水1000mI，加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液0.2mL 80℃灭菌 20min

( B ) 溶液：酵母膏 2g，水100mI，琼脂 4g，121℃湿热灭菌20min。以无菌操作趁热将( A) ( B ) 溶液混合均匀后倒 8个平板。

乳酸菌葡萄糖发酵培养基蛋白胨0.5g，牛肉膏0.5g，酵母膏0.5g，吐温 8 0 0.05ml，葡萄糖1g，蒸馏水100ml，加入1.6%溴甲酚紫溶液约0.14ml。以上成分溶解后调pH到 6.8 ～7.0分装到10只试管中。每只试管里再放置一支德拉姆氏小管。105℃湿热灭菌 15min。

牛乳培养基 12g全脂奶粉，加水100mL加入10g 葡萄糖，溶解后分装，105℃灭菌15min，取出备用。

1.2实验方法

嗜热链球菌分离与纯化将新鲜酸奶采用稀释平板涂布法进行平板涂布分离。挑取培养基上的黄色菌落( 菌落周围培养基变为黄色)，采用划线法进行分离纯化，获得纯菌种。

菌种的革兰氏染色和形态观察将分离的纯菌种接种在BCG牛乳培养基上，40℃培养28h，用无菌接种环取一环菌均匀涂布在滴有无菌水的载玻片上，自然风干。固定后进行革兰氏染色。染色后用显微镜油镜进行观察。

发酵产物鉴定——纸层析法将分离的纯菌种接种到乳酸菌葡萄糖发酵培养基上， 40℃培养48h。取产酸不产气的液体试管中发酵液做纸层析。展开剂：水30mL、苯甲醇150mL、正丁醇150mL、甲酸3.3mL。显色剂：将1.6%的溴酚蓝酒精溶液用0.1 mol／L的 NaOH 调pH到6.7。显色后，分别测定发酵液与2%标准乳酸的Rf值，确定发酵产物中是否有乳酸。