革兰氏染色法不仅用来观察细菌的形态，而且它还是细菌鉴定的重要方法，它可将全部细菌区分别革兰氏阳性菌和阴性菌两大类。革兰氏染色法的步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。
　　涂片 与单染色法相同。
　　固定 与单染色法相同。
　　结晶紫染色 染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。
　　碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。
　　酒精脱色 用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止（大约半分钟），然后立即水洗，并吸干。
　　番红复染 染色3分钟左右，然后水洗并吸干。
　　镜检 在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌；菌体显红色的为革兰氏阴性菌。