2.2.2器械用具

１)镊子类 forceps

规格：可用２０cm长的镊子。镊子过短.容易使手接触瓶口，造成污染。镊子太长，使用起来不灵活。

特殊用处：如在分离茎尖幼叶时，则用钟表镊子。

２)剪刀类 scissors

规格：用15cm长度。主要用于切断茎段、叶片等。

特殊用处：也可以用弯形剪刀，

３)解剖刀

用处：切割较小材料和分离茎尖分生组织时。

注意：刀片要经常调换，使之保持锋利状态，

４)解剖针

用处：可深入到培养瓶中，转移细胞或愈伤组织。也可用于分离微茎尖的幼叶。

2.3 培养条件

2.3.1温度 temperature

指标：大多数组织培养都是在23－27℃之间进行，一般采用25±２℃。

低于15℃时培养，组织会表现生长停止，高于35℃时对生长不利。

作用：温度不仅影响组培苗的生长速度， 也影响其分化增殖以及器官建成等发育进程。

差异：不同植物培养的适温不同。百合的最适温度是20℃、 月季是25－27℃、番茄是28℃。 不同培养目标采用的培养温度也不同， 百合鳞片在30℃下再生的小鳞茎的发叶速度和百分率都比在25℃下的高。用35℃处理草莓的茎尖分生组织3－5天，可得到无病毒苗。

2.3.2光照 light

组织培养中光照也是重要的条件之一， 主要表现在光强、光质、以及光照时间方面：

１） 光照强度light intensity 光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响， 从目前的研究情况看，光照强度对外植体、细胞的最初分裂有明显的影响。 一般来说，光照强度较强，幼苗生长的粗壮，而光照强度较弱幼苗容易徒长。

２）光质 light wave

光质对愈伤组织诱导，培养组织的增殖以及器官的分化都有明显的影响。 如百合珠芽在红光下培养，８周后，分化出愈伤组织。但在蓝光下， 几周后才出现愈伤组织，而唐菖蒲子球块接种15d后，在蓝光下培养首先出现芽，形成的幼苗生长旺盛，而白光下幼苗纤细。

３）光周期 light period

试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养， 最常用的周期是16h的光照， ８h的黑暗，研究表明，对短日照敏感的品种的器官组织， 在短日照下易分化，而在长日照下产生愈伤组织，有时需要暗培养， 尤其是一些植物的愈伤组织在暗下比在光下更好。如红花、乌饭树的愈伤组织。

2.3.3湿度humity

湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件， 容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。 前者又受琼脂含量的影响。在冬季应适当减少琼脂用量， 否则，将使培养基干硬，以致不利于外植体接触或插进培养基，导致生长发育受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况，但封闭性较高的封口材料易引起透气性受阻，也导致生长发育受影响。

环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发， 一般要求７０－８０％的相对湿度， 常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高,进而影响组织培养的正常进行；过高时，易引起棉塞长霉，造成污染。

2.3.4渗透压penetrating pressure

培养基中添加的盐类、 蔗糖、甘露醇及聚乙二醇类高分子化合物，影响到渗透压的变化。１～２个大气压对生长有促进作用，２个大气压以上就对生长有阻碍作用， ５～６个大气压生长就完全停止，６个大气压细胞就不能生存。

2.3.5 ph值

不同的植物对培养基最适pＨ值的要求也是不同的（表2-１），大多在５～６.５左右，一般培养基皆要求５.８，这基本能适应大多植物培养的需要。

2.3.6

气体gas

氧气是组织培养中必需的因素， 瓶盖封闭时要考虑通气问题，可用附有滤气膜的封口材料。 通气最好的是棉塞封闭瓶口，但棉塞易使培养基干燥， 夏季易引起污染。固体培养基可加进活性炭来增加通气度,以利于发根。培养室要经常换

气，改善室内的通气状况。液体振荡培养时，要考虑振荡的次数、振幅等，同时要考虑容器的类型、培养基等。