在组织培养工作中,配制培养基是日常工作。为简便起见,通常先配制一系列母液,即贮备液。 所谓母液是欲配制液的浓缩液,这可保证各物质成分的准确性及配制时的快速移取,并便于低温保藏。一般配成比所需浓度高10~100倍的母液。母液配制时可分别配成大量元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等。配制时注意一些离子之间易发生沉淀,如Ca2+和SO42-,Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后,会产生沉淀,一定要充分溶解再放入母液中。配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解,然后依次混合。一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液,其中维生素、氨基酸类可以分别配制,也可以混在一起。母液配好后放入冰箱内低温保存,用时再按比例稀释。
下面以MS培养基制备为例,概述其制备方法(表3-2)。
1.大量元素母液可配成10倍液。用分析天平按表3-2称取药品,分别加100ml左右蒸馏水溶解后,再用磁力搅拌器搅拌,促进溶解。注意Ca2+和PO43-易发生沉淀。然后倒入1000ml 定容瓶中,再加水定容至刻度,即成为10倍母液。
2.微量元素母液 可配成100倍液。用分析天平按表准确称取药品后,分别溶解,混合后加水定容至1000ml。
3.铁盐母液 可配成100倍液,按表称取药品,可加热溶解, 混合后加水定容至1000ml 。
4.有机物母液 可配成500倍母液。按表分别称取药品,溶解,混合后加水定容至500ml 。
5.激素母液的配制
每种激素必须单独配成母液,浓度一般配成1mg/ml。用时根据需要取用。因为激素用量较少,一次可配成50ml 或100ml。另外,多数激素难溶于水,要先溶于可溶物质,然后才能加水定容。它们的配法如下:
I AA、IBA、GA先溶于少量的95%的酒精中.再加水定容到一定浓度.
NAA可溶于热水或少量95%的酒精中,再加水定容到一定浓度.
2,4-D可用少量NaOH溶解后,再加水定容到浓度。
Kt和BA先溶于少量1mol的HCl中再加水定容.
玉米素先溶于少量95%的酒精中,再加热水到一定浓度.
配制好的母液瓶上应分别贴上标签,注明母液名称、配制倍数、日期及配
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