临床非培养标本的采集及处理操作程序

1  目的：规范临床待检标本的正确采集、送检和处理。

2  适用范围：微生物检验实验室的所有临床检测标本。

3  职责：

3.1  所有采集标本的人员均需按本SOP 操作，实验室工作人员有责任向临床医生、护士或病人

宣教。

3.2  本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：

室负责人、科主任。

4  操作程序

4.1  本实验室检测标本为：血清或血浆、痰、生殖道拭子标本、尿液及脑脊液和胸腹水。

4.2  做好标本签收，核对检验单与标本标签是否清楚无误，送检标本是否正确、合格，给所有标

本按顺序编号，按如下操作规程操作。

4.3  查找抗酸菌操作:将标本置于水浴蒸箱加温杀菌30 分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻

片，液性标本以3000 转/分钟离心5 分钟，取标本残留物或沉淀物加温涂布玻片并标注编号后

固定，行抗酸染色，先滴加抗酸染色第一液加温(用酒精灯在玻片下来回加温置染色液冒热气，

但无气泡产生为宜)染色10 分钟，自来水冲洗净染液，以硫酸美兰复染2 分钟，水洗凉干。

镜检与报告：油镜下查找分枝、不规则红色杆菌，按如下标准进行结果报告。

1)、镜检100-300 个视野（时间不少于4 分钟）未发现抗酸菌，继续观察至300 个视野仍未发

现抗酸菌者报告抗酸菌（—）；

2)、镜检100 个视野找到抗酸菌1-2 条者，报告抗酸菌可疑（±），或重涂片或重送标本检查；

3)、镜检100 个视野找到抗酸菌3-9 条者，报告抗酸杆菌阳性（＋）；

4)、镜检10 个视野找到抗酸菌1-9 条者，报告抗酸杆菌阳性（2＋）；

5)、镜检每个视野找到抗酸菌1-9 条者，报告抗酸杆菌阳性（3＋）；

6)、镜检每个视野找到抗酸菌多于9 条者，报告抗酸杆菌阳性（4＋）。

4.4  查找普通细菌操作：液性标本取离心沉淀物涂片，拭子或脓性标本直接涂布玻片并标注编号

后固定。同时取大肠标准株(ATCC25922)和金黄色葡萄球菌标准株（ATCC25922）涂片，一起行

革兰氏染色，先滴加第一液染色1 分钟，水洗，加第二液媒染1 分钟，水洗干净；以95%酒精

脱色30 秒钟后立即水洗，再加第四液复染30 秒钟，水洗后凉干。油镜下查找菌体并观察球杆

比例；观察质控菌是否合格。

4.5  墨汁染色查找隐球菌：液性标本离心取沉淀物涂片，脓性或拭子标本直接涂片并写号，以无

菌接种环粘取少量印度墨汁与玻片上标本混匀，压盖玻片，先低倍镜下找到视野再转离倍镜观察。

若找到透亮，圆形强折光，有厚荚膜的菌体报告墨汁染色阳性；否则报告阴性。

4.6 白带常规检查：盐水管直接将棉签点至玻片后以高倍镜检有无滴虫；涂片标注编号后固定，

行革兰氏染色，先滴加第一液染色1 分钟，水洗，加第二液媒染1 分钟，水洗干净；以95%酒

精脱色30 秒钟后立即水洗，再加第四液复染30 秒钟，水洗凉干后镜检查找革兰氏阴性双球菌、

霉菌或阳性球菌、线索细胞等。阴道清洁度的按如下判断标准报告：

Ⅰ度：阴道杆菌为主，并可见大量上皮细胞。

Ⅱ度：有部份阴道杆菌，但亦有部份脓细胞和杂菌，上皮细胞少见。

Ⅲ度：仅见少量阴道杆菌和上皮细胞，有大量脓细胞和杂菌。

Ⅳ度：镜下无阴道杆菌，除少量上皮细胞外，主要的几乎全是脓细胞和大量杂菌。

4.7  肥达试验：标本标明编号，以3000 转/分钟离心5 分钟；取试管架，按每标本排5 排试管，

每排5 支；各标本用加样器取100μl 血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中，加入1.9ml 0.9%

生理盐水混匀，第一排加入1：20 倍稀释血清各0.2ml，成1：40 倍；后稀释管再加入1.0ml 0.9%

生理盐水，成1：40 倍稀释，加入第二排试管各0.2   ml。同样方法对倍稀释至第四排试管，第

五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出肥达反应试验稀释菌悬液，第一列

各加入H 诊断菌液0.2 ml,第二列各加入O 诊断菌液0.2 ml，第三列各加入甲型诊断菌液0.2 ml,

第四列各加入乙型诊断菌液0.2   ml,  第五列各加入丙型诊断菌液0.2   ml,混匀，置37℃水浴箱

18-24 小时。

结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出

现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。

4.8  外菲氏试验：标本标明编号，以3000 转/分钟离心5 分钟；取试管架，按每标本排3 排试

管，每排5 支；各标本用加样器取100μl 血清置于一支稀释用试管(注明检验号)中，加入1.9ml

0.9%生理盐水混匀，第一排加入1：20 倍稀释血清各0.2ml，成1：40 倍；稀释管留1.0ml 再

加入1.0ml 0.9%生理盐水，成1：40 倍稀释，加入第二排试管各0.2 ml。同样方法对倍稀释至

第四排试管，第五排各加入0.2ml 0.9%生理盐水作阴性对照。从冰箱中拿出外菲氏反应试验稀

释菌悬液，第一列各加入OX19 诊断菌液0.2 ml,第二列各加入OX2 诊断菌液0.2 ml，第三列各

加入OXK 诊断菌液0.2 ml,混匀，置37℃水浴箱18-24 小时。

结果判断：菌体沉淀至试管底成圆点为阴性管，出现散在颗粒状凝集为阳性管。以最高稀释管出

现散在颗粒状凝集为报告滴度。若阴性对照出现凝集则需重新稀释配制诊断菌悬液重做试验。