病毒动物接种法

  实验动物在病毒学研究中有四方面用途：①分离鉴定病毒，如乙脑病毒；②连续传代通过，以减弱有毒株对人的致病力，如狂犬病病毒；③制备抗血清；④病毒致病机理的研究。

  常用的实验动物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、绵羊、鸡、猴等。在病毒学研究中，动物接种时为避免动物本身可能带有病毒，多采用实验室自己繁殖的动物。首先根据研究目的选择动物种类，对病毒致病机制的研究，则选择愈接近人类的高等动物（例如灵长类）研究结果愈有价值；其次要注意动物的年龄、性别和接种的途径等各种因素，一般年幼的动物比成年动物对病毒的敏感性高。至于接种的途径应根据病毒的嗜性决定，例如脑炎病毒以脑内注射最敏感。

（一）小白鼠尾静脉接种

【材料】

1. 动物：小白鼠

2. 病毒悬液

3. 碘酒、酒精、二甲苯、无菌0.25ml 注射器、4 号针头及小铝匣

【方法】

1. 将小白鼠固定在小铝匣内，露出尾部，用碘酒消毒尾部，然后用酒精棉球连

续擦尾部皮肤（必要时用二甲苯擦）使血管扩张。

2. 尾背和左右两侧三根血管皆为静脉，可选一根扩张较好的静脉作接种用。左手拇指捏住尾部的远端，向下弯45°，右手持注射器，于弯处进针静脉，推液0.1毫升。

注意：推注时遇阻力且皮下隆起发白时，表示针头不在血管内应拔出重新进针；如针头在血管内，推注时不感阻力，且可看到血管中血液由于注入液体而后退。接种后逐日观察动物发病情况。

（二）小白鼠鼻内接种（录像）

【材料】

小白鼠、流感病毒鼠肺适应株病毒悬液、无菌小试管、无菌毛细管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。

【方法】

1. 首先将沾有乙醚的棉球放入一清洁小玻瓶内。左手握小瓶，右手抓住小白鼠，将其头部塞入瓶口，进行全身麻醉。注意麻醉深度，不宜太浅或太深，太深时易遭致麻醉死亡或非特异性吸入性肺炎，太浅则易在滴种时打喷嚏。

2. 用无菌毛细吸管吸取病毒悬液少许，连同毛细吸管插在无菌试管中备用。

3. 用左手将小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其头部朝前并呈仰卧位置，另一手取事先吸有病毒悬液的吸管，慢慢滴出一点于滴管口而不使其自然掉落，呈悬滴状。将悬滴靠近动物鼻尖，动物在呼吸时自然吸入，一般为0.03～0.05 毫升，不宜过多。

4. 小白鼠慢慢苏醒，在饲养盒中逐日开始发病，发病的症状常为毛耸、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖尸体可观察到肺炎或血性病灶。

（三）小白鼠脑内接种

【材料】

脑炎病毒（小白鼠脑脊髓炎病毒）悬液。脑组织先用无菌生理盐水洗去血液，再加10％脱脂奶盐水研磨成10－1 悬液，然后用3000 转/分离心沉淀30 分钟，吸取上清液供接种用。

小白鼠：3 周龄，体重6～8 克。无菌 0.25 毫升注射器及针头（4 号）、煮针锅、碘酊、棉签。

【方法】

1. 以无菌0.25 毫升注射器抽取脑炎病毒悬液0.1 毫升，去除注射器内的气泡。

2. 取出小白鼠，左手将小白鼠固定，固定时用大拇指和食指捏住小白鼠的头部，左手手掌轻轻按住小白鼠的体部。

3. 右手以棉签蘸以碘酒，消毒小白鼠颞部皮毛（不碰到眼）。

4. 右手拿注射器在小白鼠颞部（眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向）刺入，进入颅腔，进针2～3 毫米，不要插得太深，注射量为0.02～0.03 毫升。

5. 注射完毕，将用过得注射器放入煮针锅内煮沸消毒。动物一般在3～4 天后开始发病，食欲减退，活动迟钝，毛耸，震颤，慢慢发展为麻痹，瘫痪而死亡。

本法适用于一些脑炎病毒的分离培养。