瓷珠菌种保存管是实验室保存菌种的容器，管内有12 颗表面凹孔小瓷珠用于细菌的吸附和 保存，可在保存周期内使用12 次（每次1个）。菌种保存管使用过程中，将细菌接种在菌种保 存管内，放置于-20℃或-80℃环境中可长期保存（视不同菌种与保存温度，一般可保存3-10 年）, 同时菌种保存管的取用和保存较为便利（取用复苏及保存菌株仅需1分钟）

    由于菌种保存管取用和保存便利，不仅可保存一般细菌，苛刻菌，以及霉菌、酵母菌等真菌 也可在低温条件下通过菌种保存管保存，因此菌种保存管被广泛应用于临床领域（临床药敏试验 菌株的保存）、疾控领域（监测分离到的菌株的保存）、菌种保存中心（菌株的日常取用与保存） 以及制药企业（阳性对照菌株保存和取用）等领域。

产品原理

    细菌在适宜其生长的环境中（培养环境:需氧、厌氧、微需氧,培养温度:35℃或25℃），会在 极短时间内（8-18 小时）经历由调整期-对数期-稳定期-衰退期)四个生长周期(真菌需要培养7 天、酵母菌需要培养三天产生孢子后保存，具体情况需看对数期的时间确定)。菌种保存的最终目的，是能够在以后的时间使用该菌种。要达到这个目的，一般同时结合以下的三方面的措施：

1.取生命力最旺盛的对数期阶段的菌种，该阶段菌种生命力最为顽强，能够更好的耐受保存过程 中温度的变化。

2.通过降低温度，使细菌其进入“休眠状态”，保存过程中该菌种处于最低的代谢活动。

3.降低细菌在降温“休眠过程”和升温“复苏过程”中，温度变化对菌种的伤害。

海博生物菌种保存管的保存原理，为目前较多实验室所常用的甘油保存法的改进方法，可以 简述为“甘油小瓷珠保存法”。

    产品保存时，将菌种刮取或转移至菌种保存管中，上下颠倒保存管，重力作用下，菌种均匀 分布于冻存保护液中。将冻存管中的全部冻存液吸取出菌种保存管。密布凹孔的小瓷珠，扩大了 小瓷珠的表面张力，在表面张力作用下，每个小瓷珠的表面紧紧覆盖着一层冻存保护液，而菌种则存在于这层保护液之中。

    产品使用时，从-20/-40/-80 冰箱中拿出菌种存管，轻轻晃动。由于此时的保存管内已没有 聚集的液体，瓷珠在低温下也会很容易相互分离，而不必像传统甘油法保存时需要很长的甘油融 化时间。随后，用接种针任取一瓷珠，就可直接在平板上划线接种或置于增菌液中培养。 接种完成后，立即将该菌种保存管置于原有的保存环境中，由于此种方法能够快速的取用菌株，因此，菌种保存管内部温度的波动相当的小。因此，能够极大避免保存温度的大幅波动对的菌种的伤害。

注意事项

1、被保存的菌种要求是经过纯化后培养18-24h 内的新鲜菌种（细菌18-24h，酵母菌需3 天， 形成孢子的微生物保存孢子，而放线菌和丝状真菌需培养7 天后保存），不宜使用老化或未经鉴 定的菌种。

2、做厌氧菌保存时，应提供厌氧的环境，如厌氧箱、厌氧袋，菌种保存管中可通入氮气来驱除 保存菌种时所引入的氧气。菌种复苏时，也要创造厌氧的环境。

3、菌种复苏完成后，对使用菌株需要进行再次纯化，以保证菌株的单一性。

4、菌种保存浓度必须要做3-4 麦氏比浊度，如接种浓度过低将会降低复苏效果。

5、待保存于菌种保存管中的菌种完全乳化均匀吸附在多孔小瓷珠后，要将多余的菌种保存液吸 取出来并弃之，否则在复苏时的冻融过程中会损伤菌株活性。

客户问答：

1、为什么说明书上说可在常温下保存一年，资料又说可以长期保存？

答：菌种保存管未使用前，可在常温下保存1 年，使用后，低温保存，使微生物活性保持到最低 代谢活动状态，在-20℃可保存1-3 年，-80℃或液氮保存可保存5-10 年。不同菌种及不同的保 存温度保存时间会有所不同。（例如：大肠、沙门等常规细菌-20℃我们目前可以保存到6 年）

2、 菌种保存管能保存霉菌及酵母菌吗？

答：可以。对于霉菌等真菌需培养7 天进行保存,而酵母菌需培养三天将孢子洗脱下来进行保存, 保存管中的小瓷珠可以作为介质来吸附孢子和菌丝,相当于砂土保存法中砂土做为载体起到的作用。

3、所有的菌都能保存吗？如果不是的话，什么样的菌可以保存？什么样的菌不可以保存？

答：可以。菌种保存的原理是DNA 复制时自发突变导致菌种退化，因此要创造代谢不活泼的状 态,而菌种保存时使菌种进入休眠态（孢子、芽孢),并创造干燥、低温、缺氧、缺营养的环境,创造 的环境越接近此状态,所保存的菌种的时间就越长,所以从原理上讲,所有菌种都可用这种方法保存, 但需要注意的是,由于苛刻菌（如流感嗜血杆菌、脑膜炎萘瑟氏菌）等特殊细菌保存时，需-80℃ 或更低温度保存,才可以做到更长期的保存。

4、我能用菌种保存管永久保存菌株吗？

答：温度越低，保藏效果越好。从目前的试验数据及实际保存效果来看,-20℃可保存1-5 年，-80℃ 或液氮中可保存5-10 年，但需要注意的是所保存的菌种需每年抽检进行生化特征的鉴定,确定菌株无变异。

5、为什么在使用时要将管内的液体尽可能多的吸出？

答：吸出液体可避免反复冻融形成的冰晶对菌株的损伤，加快复苏的过程,因此，要尽可能的将与 菌种混匀后的保存液吸净.而常用的甘油法,在复苏的过程中需用水浴锅快速溶解,在此过程中,对菌株伤害较大。

6、为什么在菌种保存时，要上下颠倒？为什么不能旋摇？

答：上下颠倒，可使菌悬液充分混匀，菌株充分、均匀地吸附到小瓷珠上，旋摇不利于菌悬液充分混匀,反而会使菌株全部沉淀于管底。

7、菌种保存管在使用前需要放置冰箱吗？

答：本公司菌种保存管采用特殊生产工艺,并对产品进行长期留样观察,以及稳定性试验,在使用前可以室温存放1 年，因此在发货过程等过程中室温放置不会影响产品效果。

8、将菌株反复冻存，到底对菌株有什么影响？

答：低温会使菌株细胞内的水分形成冰晶，从而引起细胞结构尤其是细胞膜的损伤。 细胞体积大者一般要比较小者对低温更为敏感，而无细胞壁者则比有细胞壁者敏感。如果放到低温（不是一般冰箱）进行冷冻时，会产生冰晶，冰晶呈针状，极易导致细菌的严重损伤。用电镜观察，可见细菌的核膜上有大量针尖样小孔，当从低温下移出并开始升温时，冰晶又会变大，故反复冻存，会对菌株造成极大损伤。

9、在使用后，菌种保存管的保存环境？需要-80℃冰箱吗？

答：本公司菌种保存管采用的是低温冷冻保存法，因此，使用后，需放置低温环境，如-20℃、-80℃或液氮中保存，而且温度越低，保存效果越好。用户需根据菌种的保存要求选择具体保存温度。

10、为什么在取用菌株时，操作过程要求快速？

答：菌种保存复苏的原则,要求慢冻快融,之所以要求快速,是因为在菌种复苏的过程中, 长时间的 溶解过程会对所保存的菌种造成损伤,而经过改良的保存方法最大程度的避免复苏所造 成的影响,但我们还是建议遵循菌种的保存复苏原则,保证所复苏菌种的复苏率。

11、为什么有时候菌种的保存效果不佳？

答：1、可能是由于保存后未将保存液吸尽，反复冻融形成冰晶损伤菌株细胞，影响了菌株活性。

2、确定所保存的菌种是否为对数生长期的菌种，我们建议普通菌种保存为18 小时内的新鲜菌种，而霉菌和酵母菌需要保存其对数生长期阶段的菌种。

12、菌种保藏时为什么要进行分离纯化？

答：分离纯化后才能获得单一菌株，单一菌株进行菌种保藏才有意义，防止菌种交叉污染和变异，这也是菌种保存的基本原则。

13、该产品能否用于菌种的运送，如果可以在什么条件下运送？

答：就目前试验数据而言，我们只建议用于普通细菌的短期运送，对于苛刻菌及厌氧菌不能用此方法，并且在运送期间保存液不得吸出，2-8℃运送不超过5 天 ，运送到客户手中，需重新纯化。另外需要说明的是如弧菌属的菌种需要常温运送,其对2-8℃温度及其敏感。

14、菌种保存管对于平板来说，对挑选菌落个数有要求吗？还是将整个平板的菌落全部刮入管中？

答：对于要保存的细菌一般是要进行2-3 次的纯化，要保证一个平板上的菌是由单一菌落传代而来的，所以在细菌保存的过程中，为了保证制备的菌悬液可以达到3-4MCF，是可以将整个平板的的细菌全部刮到管中的，如果平板长的比较满一般半个平板就够用,具体用量也根据菌种的不同有所差异,如霉菌、酵母菌在保存时，不适合用浊度法。

15、对于液体培养基培养的纯菌，是否也可以用咱们的菌种保存管？如果可以的话， 怎么操作？

答：是可以用的，如果液体培养基能保证是纯菌的话，可以直接离心，弃掉上清，然后把保存管中液体吸进去充分混匀，然后再转移到菌种保存管中，整个过程要注意无菌操作。不过，一般菌种保存管最好选择平板菌落进行保存，因为液体培养基中有杂菌是不易观察出来的。

16、为什么我保存在平板上的菌每隔一段时间就得重新传一次，即使是放在温度为2-8 度的冰箱中？

答：在2-8℃保存的菌种,并不是出于低代谢率的环境,所以此环境下保存的菌种极易变异,故一般一个月重新传代一次,确定菌种有无变异,并且连续传5 代后的菌种不能使用。

17、为什么说，如果有条件的话，菌种保存管最好置于-80 冰箱或液氮中？

答：因为，贮存在-70℃以下低温中能减少冰晶形成，可极大降低冰晶形成对细菌的伤害，同时可为被保存的菌种创造更低的代谢环境，从而延长细菌保存的时间。

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