芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，通常为圆形或椭圆形。

 芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难。因此，用着色力强的染色剂(如孔雀石绿)在加热条件下进行染色时，染料不仅可以进入菌体，而且也可以进入芽孢，进入菌体的染料可经水洗脱色，而进入芽孢的染色的染料则难以透出，若再用复染液(如沙黄水溶液)染色后，芽孢仍然保留初染剂的颜色，而菌体被染成复染剂的颜色，即菌体和芽孢分别染成红色和绿色易于区分。

 在芽孢染色的过程中最关键的操作是：加热。因为芽孢壁厚、透性低，所以芽孢难以着色，只有在加热的条件下，芽孢的渗透性发生了变化，染液才能渗透进入芽孢。因此在芽孢染色时，需要持续加热染料，使之冒蒸汽，但不能沸腾。加热染色时间越长，芽孢染色越深。如果最终芽孢着色不够，多半是加热不够所致。

 青岛海博生物技术有限公司的芽孢染色液使用方法：

 1、常规涂片，待干燥后，在火焰上过3次以固定；

 2、滴加3-4滴A液于已固定的涂片上；

 3、用木夹夹住载玻片在火焰上持续加热6-8s；

 4、待玻片冷却后，倾去染液，水洗至不再褪色为止；

 5、用B液复染1min，水洗至水为无色。待干燥后，至油镜观察，芽孢呈绿色，菌体呈红色。

 注意：第3步，持续加热6-8s足以使染液冒蒸汽且不会沸腾。

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