R2A琼脂培养基（即用型袋装）(200ml)（药典）

用途：用于纯化水中菌落总数的测定，（EP、USP、Chp标准）

成分（g/L）

检验原理：

酵母浸出粉、蛋白胨、酸蛋白水解物提供氮源、维生素、生长因子；葡萄糖、为可发酵糖类；可溶性淀粉可以吸收菌在复苏过程产生的有害物质；丙酮酸钠可增强细菌的复苏。磷酸氢二钾为酸碱缓冲剂；无水硫酸镁提供二价阳离子；琼脂为凝固剂。

使用方法：

步骤1【复溶加热】：将未拆封的HBBD培养基（保留外层包装袋）完全浸入100℃沸水浴中。

加热方式：

 建议使用电磁炉+不锈钢锅/不锈钢桶等容器（加水至完全浸没袋体）。或使用实验室水浴锅（需注意升温较慢，建议提前预热）

 ·加热时容器勿完全密封，避免压力升高导致袋内漏液。

 ·可选用带孔的容器盖，或留出一些缝隙排气----详情见视频。

步骤2【溶解】：持续加热20~30分钟后，轻摇袋体确认培养基完全溶解（均匀液态无凝块）。

步骤3【冷却】：取出袋体，自然冷却至45℃~50℃（手感微热不烫）。

步骤4【无菌倾注】：在无菌环境下，撕开外层包装，拧开瓶盖，将培养基缓缓倾注至无菌平皿中，静置凝固后使用。

储存条件及有效期

1.2-25℃保存。

2.本产品在储存条件下有效期为六个月。

使用方法

将本品完整包装放置于100℃沸水浴中加热20-30min，待培养基至培养基完全溶解后冷却至45℃~50℃时，撕开外层包装，在无菌环境中拧开盖子，将培养基倾入无菌平皿中，凝固后备用。

注意事项

1.若出现污染、破损、变色、泄露等现象时，则不能使用。

2.水浴加热过程中无需打开外层包装，产品内部有少量气体受热后出现膨胀为正常现象。

3.使用后的培养基应进行消毒处理。

不同药典关于纯化水的微生物检测方法和质量标准

中国药典

  【检查】 微生物限度 取本品不少于1ml，按薄膜过滤法处理后，采用 R2A 琼脂培养基，30～35℃培养不少于5天，依法检查（通则1105），每1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。

操作简述：

  除葡萄糖、琼脂外，取上述成分，混合，微温溶解，调节pH值使加热后在25℃的pH值为7.2±0.2，加入琼脂，加热溶化后，再加入葡萄糖，摇匀，分装，灭菌。 R2A 琼脂培养基适用性检查试验 照通则1105中“计数培养基适用性检查”的胰酪大豆胨琼脂培养基的适用性检查方法进行，试验菌株为铜绿假单胞菌和枯草芽孢杆菌。应符合规定。

USP标准

  在美国药典中，推荐使用0.45μm薄膜过滤法，并同时使用高营养培养基（平板计数琼脂培养基（PCA））于30-35℃培养72小时以上，和低营养培养基（R2A琼脂）于20-25℃培养96小时以上。检测标准为：≤100cfu/ml 。

操作简述：（可根据实际情况调整）

  量取10ml充分混匀的水样，以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量为100ml，共冲洗1次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于琼脂平板上。共制备2张滤膜，一张滤膜贴于平板计数琼脂培养基平板（高营养培养基）置30℃~35℃生化培养箱中倒置培养2~3天，计数。另一张滤膜贴于R2A琼脂平板（低营养培奍基），置20℃~25℃生化培养箱倒置培养5~7天，计数。以培养基平板上菌落数生长较多者作为检测结果， 按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。

EP标准

  在欧洲药典中使用薄膜过滤法（0.45μm 孔径滤膜），使用R2A琼脂培养基在30℃～35℃培养5天以上。 质量标准：≤100cfu/mL。

操作简述：（可根据实际情况训整）

  量取10ml充分混匀的水样，以无菌操作加入安装好的薄膜过滤器内，过滤。并用pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗滤膜,每张滤膜每次冲洗量为100ml，共冲洗1次。过滤后，取出滤膜，正面朝上贴于R2A琼脂平板上，置30℃～35℃生化培养箱中倒置培养5天，计数。按比例折算为1ml纯化水中的微生物数量后报告。

R2A琼脂培养基（即用型袋装）(200ml)（药典）微生物灵敏度试验：

按标签用法制备培养基，接种以下质控菌株，放置30-35℃需氧培养18小时。

相关资料：

操作视频｜袋装即用型琼脂培养基使用方法-点击查看实验操作视频

R2A琼脂培养基的原理及应用 点击查看