一、参考标准

  《SN/T 2552.8-2010 乳及乳制品卫生微生物学检验方法 第8部分：普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验》

二、生物学特性

  变形杆菌为能活泼运动而又极为多形性的一群肠道菌，有球形和丝状形，具有鞭毛、无荚膜、无芽胞、革兰氏阴性，运动活泼。在固体培养基上呈扩散生长，形成迁徙生长现象。

三、检验程序

图1 普通变形杆菌和奇异变形杆菌检验程序

四、检验方法和结果

  1、选择性增菌

  普通变形杆菌和奇异变形杆菌在GN增菌液中36℃±1℃培养18-24h后生长浑浊，如图2所示：

a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌

图2 GN增菌液的培养结果

  2、初步生化鉴定

  ①SS琼脂试验

  取增菌液1环，划线接种于SS平板上，于36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌在SS平板上的典型菌落为：1mm-2mm大小、无色半透明或有黑色中心，边缘整齐，表面光滑的圆形菌落，如下图所示：

a:奇异变形杆菌	b:普通变形杆菌

  ②克氏双糖培养基试验

  挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接种混合克氏双糖铁斜面，接种时先在斜面划线，然后再穿刺到底层放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌的试验现象为：斜面红/底层黄（部分区域黑色），发酵葡萄糖但不发酵乳糖同时产生硫化氢和产气，如图3所示。

  注意：能产生硫化氢的菌应及时观察试验结果，以免生成的硫化铁形成黑色区域，遮盖斜面与底层的颜色影响判断结果。

a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌

图3 克氏双糖的培养结果

  ③尿素琼脂试验

  挑取SS平板上的可疑菌落，穿刺接种尿素琼脂斜面，接种时先在斜面划线，然后再穿刺到底层放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，普通变形杆菌和奇异变形杆菌的试验现象为尿素培养基变玫红，如图4所示：

空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌

图4 尿素培养基的培养结果

  ④苯丙氨酸脱氨酶培养基试验

  挑取SS平板上的可疑菌落，接种在苯丙氨酸脱氨酶培养基斜面划线，然后放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，培养结束后滴加4-5滴苯丙氨酸指示剂，使其覆盖培养基表面，1min-5min呈现绿色则为阳性，如图5所示：

a:空白对照；b:普通变形杆菌；c:奇异变形杆菌

图5 苯丙氨酸脱氨酶培养基的培养结果

  3、进一步的生化鉴定

  符合上一步要求的可疑菌落需进一步进行其他生化试验。

  ①靛基质试验

  将菌接种于胰蛋白水培养基中，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，滴加Kovacs氏靛基质试剂，立即观察反应结果。普通变形杆菌为玫红色环，为阳性；奇异变形杆菌为黄色环，为阴性，如图6所示：

a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌；

图6 靛基质的培养结果

  ②鸟氨酸脱羧酶试验

  将菌接种于鸟氨酸脱羧酶生化管中，加无菌液体石蜡覆盖培养基液体表面，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，接种普通变形杆菌的培养基呈阴性，培养基变黄；接种奇异变形杆菌的培养基呈阳性，培养基为紫色，如图7所示：

a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌

图7 鸟氨酸脱羧酶的培养结果

  ③甘露醇试验

  将菌接种于鸟氨酸脱羧酶生化管中，放入培养箱36℃±1℃培养18-24h，接种奇异变形杆菌和普通变形杆菌的培养基都呈阴性，培养基颜色为蓝色或蓝绿色，如图8所示：

a:空白对照；b:奇异变形杆菌；c:普通变形杆菌

图8 甘露醇的培养结果

  ④氧化酶试验

  变形杆菌氧化酶试验不变色，为阴性，铜绿假单胞菌为阳性变蓝，如图9所示：

a:铜绿假单胞菌10104；b:奇异变形杆菌

图9 鸟氨酸脱羧酶的培养结果

  注：普通变形杆菌和奇异变形杆菌生化鉴定表如下：

  注：本文属海博生物原创，未经允许不得转载。