一、产品用途及原理
用途:用于培养猪支原体的基础培养基。
原理:PPLO肉汤、脑心浸液、酵母浸粉提供氮源,维生素,氨基酸和生长因子;猪血清提供甾醇、脂质类并补充氨基酸;Hank's平衡盐维持培养基渗透压和pH值;苯酚红为染料;抑菌剂抑制杂菌生长。
二、培养基配方(g/1300mL)
PPLO肉汤 |
8.7 |
脑心浸液 |
8.2 |
酵母浸粉 |
5.0 |
Hank's平衡盐 |
4.475 |
苯酚红 |
0.0225 |
pH值7.7±0.1(25℃) |
三、试验方法
1、称取本品26.4g,加热溶解于1300mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min,冷却至室温,无菌操作加入433mL猪血清和1支抑菌剂(含杆菌肽0.25g、青霉素0.25g)并调节pH至7.7±0.1(25℃),混匀,分装,备用。
2、制备质控菌株,接种至培养基中,做10倍系列稀释,稀释至10-9,并做空白对照。
3、放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7d-21d。
四、质控结果
接种以下质控菌株,放置于36℃±1℃恒温培养箱中,微需氧培养7d-21d。猪肺炎支原体培养至12d的试验结果如图1所示。
质控菌株 |
菌株编号 |
方法 |
质控结果 |
其它特征 |
猪肺炎支原体 |
/ |
定量 |
生长良好 |
10-9稀释度管变黄 |
图1 猪支原体培养基培养猪肺炎支原体12d时的试验结果
五、试验注意事项
1、若使用非一次性试管等容器进行试验,容器使用前应使用蒸馏水冲洗干净,确保无洗涤液等残留物,以免增加试验的不确定性或污染。
2、灭菌结束后,试管口会有水珠,在进行梯度稀释时,水珠很容易与空气中的细菌接触以致污染,因此,试管口应灼烧至干燥,胶塞也需过火,振荡操作后,若培养基接触到胶塞,还需再次进行灼烧操作。
3、调节pH时,使用的酸碱试剂需是无菌的。
4、支原体培养前应使用封口膜封口,可提供微需氧环境以及降低污染的风险。
相关产品:
注:本文属海博生物原创,未经允许不得转载。
搜产品