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培养基的检验与验收(六)选择性增菌培养基


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在分离特定的目标菌时,若样品中存在较多的干扰菌,直接分离会比较困难,而选择性增菌培养基的主要作用是尽可能抑制杂菌的生长,让目标菌得到较多的增殖,逐渐称为优势群体,则可以很好的提高检出率。本次就来讲一下选择性增菌培养基的检验与验收方法。
培养基的出厂检验
本次以7.5%氯化钠肉汤为例进行讲解
1.混合菌的接种:在试管中接种10-100CFU的金黄色葡萄球菌和1000-5000CFU的大肠埃希氏菌,可将金黄色葡萄球菌制成约10-100CFU/mL的菌悬液,大肠埃希氏菌制成约10000-50000CFU/mL的菌悬液,吸取0.9mL金黄色葡萄球菌菌液及0.1mL大肠埃希氏菌菌液至7.5%氯化钠肉汤中,金黄色葡萄球菌菌液可直接使用TSA倾注计数接种量,大肠埃希氏菌菌液需进行百倍稀释后,吸取1mL菌液用TSA倾注计数接种量。将接种后的培养基置36±1℃培养18-24h。
2.非目标菌的接种:吸取1mL 1000-5000CFU/mL非目标菌菌悬液加入至待测培养基试管中,接种2支平行,置于标准中规定的条件下进行培养。
3.混合菌培养液的接种:用10μL接种环挑取1环培养后的7.5%氯化钠肉汤混合菌测试管的培养液,划线到Baird-parker琼脂平板上,每支试管划1个平板,36±1℃培养24-48h。
4.非目标菌培养液的接种:吸取10μL经培养后的非目标菌培养液,涂布或倾注法接种到非选择性平板(如TSA)上。同时每管接种一个平板,并按标准规定的培养条件培养平板。
5.结果判定:混合菌接种选择性平板上的典型特征菌落数应>10CFU,非目标菌在非选择性平板上菌落数应<100CFU。
培养基的验收方法
将质控菌株接种至非选择性肉汤培养基中过夜培养,稀释至10-3,也可采用其他方法制备含菌量105-107CFU/mL的菌悬液,使用1μL接种环挑取1环菌液,接种至待测培养基中,置于标准规定的条件进行培养。
结果判定:接种目标菌的试管浊度值应达到2,接种非目标菌的试管浊度应为0或1。

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