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生化试验

  用已培养的营养琼脂斜面上生长的菌苔，进行生化试验：即β-半乳糖苷酶、尿素、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、水杨苷、七叶苷、靛基质、甘露醇、棉子糖和甘油。

附加生化实验

  由于某些不活泼的大肠埃希氏菌（anaerogenic E.coli）、A-D（Alkalescens-D isparbiotypes碱性-异型）菌的部分生化特征与志贺氏菌相似，并能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集；因此前面生化实验符合志贺氏菌属生化特性的培养物还需另加葡萄糖胺、西蒙氏柠檬酸盐、粘液酸盐试验(36℃培养24 h～48 h)。

  可以使用海博生化鉴定试剂盒：HBIG04-1 HBI志贺氏菌生化鉴定条(GB)，需另购HB8279 Kovacs氏靛基质试剂盒和GS070无菌液体石蜡。

  菌悬液法：取一支无菌生理盐水试管，用接种环从营养琼脂斜面挑取菌落至无菌生理盐水管中，充分振荡混匀制成0.5麦氏浊度的均一细菌悬液(约109 CFU/mL)，打开生化鉴定条的盖子，用75%酒精擦拭打孔器，用打孔器开孔或直接把膜撕掉；每孔加入100 μL菌悬液，其中固体和半固体生化管采用穿剌接种。赖氨酸、鸟氨酸和氨基酸对照需加灭菌石蜡覆盖液面。接种完后做好标记，盖上盖子，放入底托中，放置36℃±1℃培养。培养结束后，放在记录卡上观察。

  靛基质试验需在培养结束后滴加靛基质试剂，立即或数秒内出现玫红色环为阳性反应，黄色环为阴性反应。