鸡毒支原体培养基基础

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1.培养基的配制及物品的准备
配制海博鸡毒支原体培养基基础于锥形瓶中，取空试管、胶塞、0.22μm滤头、移液枪头、装有10 mL蒸馏水的锥形瓶、碳酸钠溶液包好。培养基于116℃灭菌锅中灭菌30分钟。其它物品于121℃的灭菌锅中灭菌15分钟。(注意：试管与胶塞要分开包装灭菌，塞好塞子的试管直接灭菌可能会出现灭菌不彻底的现象，增加了污染的风险)。
2.添加血清及添加剂
灭菌结束后，待培养基冷却至室温后，向培养基中添加马血清及添加剂。添加剂可使用海博鸡毒支原体培养基基础配套添加剂（HBYM329-1a）或自己配制。添加剂的配制方法为：称取辅酶I 0.1 g、L-半胱氨酸0.1 g、精氨酸0.4 g添加至10 mL无菌水中配制成浓度分别为0.01 g/mL、0.01 g/mL、0.04 g/mL的母液，混合均匀后，使用无菌注射器吸取溶液经0.22μm滤头进行过滤除菌，之后每100 mL培养基中添加1 mL的添加剂母液。将培养基分装至试管中。
3.调节pH
接种鸡毒支原体前需先将培养基pH至7.6~7.8，用ph仪，测试培养基的ph为7.54，可添加适量的碳酸钠至培养基中，使培养基ph在7.6~7.8之间。本次确定碳酸钠平均添加量为10 μL。向每支试验用试管中添加10 μL碳酸钠并震荡均匀。（注意：均使用灭菌后的碳酸钠以避免误差）。
4.接种鸡毒支原体
接种鸡毒支原体于培养基中混合均匀记为-1，并做梯度稀释至-9，设两支未接种的培养基为阴性对照管。使用封口膜封口，之后放置于36℃±1℃的培养箱中培养5-7天。
5.结果观察
培养第5天，灵敏度为9。