操作要点 

接种环的制备：圆滑，接口无缝隙，大小合适

接种环的灼烧：在进行划线接种之前，必须先将接种环在酒精灯上灼烧，以杀死可能存在的微生物，避免污染培养物。每次划线前也需要进行灼烧，以杀死残留菌种，确保每次划线的菌种来自上次划线的末端。

冷却后再进行操作：灼烧接种环后，需要将其冷却后再进行操作，以避免高温杀死菌种。

划线力度和分布：划线时用力要均匀，避免用力过大划破培养基。一般三区之字划线，划线时一区菌落密集部分不需要太大面积，一区到二区开端不能太快，以免后面菌落生长稀疏，三区从二区划线的末端开始，这样能保证逐渐减少微生物数目，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。

避免污染：划线结束后，再次灼烧接种环，以杀死残留菌种，避免污染环境和交叉感染。

这些注意事项确保了划线接种的准确性和有效性，同时减少了污染的风险。